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武漢賽科(kē)成科(kē)技(jì )有(yǒu)限公(gōng)司

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    片狀載體(tǐ)技(jì )術賦能(néng)Vero細胞狂犬疫苗制備
    發布日期：2024.08.09

    狂犬病作(zuò)為(wèi)一種人獸共患病，每年大約會造成6萬人死亡。然而，根據世界衛生組織的數據，它仍然是發展中(zhōng)國(guó)家最被忽視的疾病之一。人狂犬病疫苗接種是暴露前和暴露後預防的重要組成環節[1]。

     

    我國(guó)狂苗使用(yòng)多(duō)種細胞系，包括Vero細胞、地鼠腎細胞、雞胚及人二倍體(tǐ)細胞。Vero細胞是目前狂犬疫苗的主流細胞系，具(jù)有(yǒu)培養效率高、外源性污染低、病毒滴度高等優勢。同時，Vero細胞狂苗提純工(gōng)藝簡單高效，易于放大，可(kě)以為(wèi)企業帶來更高的生産(chǎn)效益。

    微信圖片_20240329102052.png圖1：2017~2020中(zhōng)國(guó)狂犬疫苗品種批簽發數量（萬支）

    病毒收獲液的滴度是影響疫苗效價的一個關鍵因素，《中(zhōng)國(guó)藥典》也對狂犬疫苗的檢定作(zuò)出了要求。采用(yòng)轉瓶進行生産(chǎn)所收獲的病毒原液毒力較低，經純化後很(hěn)難生産(chǎn)出合格的狂犬病疫苗，而通過生物(wù)反應器對細胞進行高密度的培養，可(kě)以制備出高毒力的病毒收獲液，從而提高狂犬病疫苗的效價。

     

    《中(zhōng)國(guó)藥典》對凍幹人用(yòng)狂犬疫苗（Vero細胞）的檢定要求（節選）

    ✦ 病毒滴定：病毒滴度應不低于6.0 lg LD50/mL

    ✦ 蛋白質(zhì)含量：取純化後未加入人血白蛋白的病毒液，應不高于80μg/劑

    ✦ Vero細胞DNA殘留：采用(yòng)熒光定量PCR法,應不高于3ng/劑

    ✦ 效價測定：應不低于2.5IU/劑

    ✦ Vero細胞蛋白質(zhì)殘留量：采用(yòng)酶聯免疫吸附法,應不高于6.0μg/劑

     

    高密度培養離不開片狀載體(tǐ)系統。賽科(kē)成的籃式攪拌槳，搭載片狀載體(tǐ)的高密度和高活力細胞灌流培養模式，不僅為(wèi)病毒擴增提供了相對穩定的培養環境，還延長(cháng)了病毒培養時間并增加了收獲量，在一定程度上減小(xiǎo)了批間差異、縮小(xiǎo)了生産(chǎn)空間和時間，在降低經濟投入的同時保證了産(chǎn)品均一性［2］。而由于片狀載體(tǐ)對細胞的貼壁性能(néng)很(hěn)強，可(kě)在灌流過程中(zhōng)輕松收獲上清中(zhōng)的病毒，且宿主蛋白和DNA含量降低，更有(yǒu)利于下遊純化[3]。

    0726配圖2.png圖2：賽科(kē)成片狀載體(tǐ)

    狂犬疫苗制備工(gōng)藝流程：

    狂犬疫苗制備工(gōng)藝流程.jpg圖3：狂犬疫苗制備工(gōng)藝流程圖[5]

    賽科(kē)成專利片狀載體(tǐ)細胞培養袋，将片狀載體(tǐ)預填充在一次性培養袋中(zhōng)，并進行輻照滅菌。片狀載體(tǐ)袋可(kě)以配合SKC600擺床反應器使用(yòng)，實現高密度灌流培養。1個2L的片狀載體(tǐ)袋提供的貼壁面積為(wèi)36,000cm2，相當于16個15000ml轉瓶、160個方瓶或56層細胞工(gōng)廠。

    片狀載體(tǐ)技(jì )術賦能(néng)Vero細胞狂犬疫苗制備配圖2.png圖4：賽科(kē)成技(jì )術支持團隊演示片狀載體(tǐ)袋手工(gōng)消化技(jì )術

     

    結語：

    除了狂犬疫苗外，籃式片狀載體(tǐ)培養系統目前已成功應用(yòng)于日本腦炎、流感、新(xīn)冠、脊髓灰質(zhì)炎、豬瘟、小(xiǎo)反刍動物(wù)麻疹、豬腹瀉、杆狀病毒及腺相關病毒［4-5］的高滴度培養。過程的經濟可(kě)靠性和高細胞活性生長(cháng)是制備工(gōng)藝中(zhōng)的兩大關鍵因素。如何提高反應器的穩定性及控制精(jīng)度，如何優化生産(chǎn)中(zhōng)所用(yòng)的一次性耗材及載體(tǐ)材料，如何優化實驗過程及參數，進行放大測試，這些需要本土醫(yī)藥企業和上遊供應鏈的廠家加強合作(zuò)，共同推動技(jì )術的優化和革新(xīn)。

     

     

    參考文(wén)獻：

    [1] Giesen A, Gniel D, Malerczyk C. 30 Years of rabies vaccination with Rabipur: a summary of clinical data and global experience. Expert Rev Vaccines. 2015 Mar;14(3):351-67. doi: 10.1586/14760584.2015.1011134. Erratum in: Expert Rev Vaccines. 2015 May;14(5):775. doi: 10.1586/14760584.2015.1027863. PMID: 25683583.

    [2] LAI Z C，WENG T，ZENG J H，et al. Evaluation of novel dis ‐ posable bioreactors on pandemic influenza virus production［J］. PLoS One，2019，14（8）：e0220803. DOI：10. 1371／journal. pone. 0220803.（in Chinese）

    [3] RHAZI H，SSAFINI N，MIKOU K，et al. Production of small ruminant morbillivirus，rift valley fever virus and lumpy skin disease virus in CelCradle ‐500A bioreactors［J］. BMC Vet Res， 2021，17（1）：93

    [4] CESCON D W，HAIBE ‐KAINS B，MAK T W. APOBEC3B ex‐ pression in breast cancer reflects cellular proliferation，while a deletion polymorphism is associated with immune activation ［J］. Proc Natl Acad Sci U S A，2015，112（9）：2841‐2846

    [5] 楊屹,汝東宇,郭秀俠,崔文(wén)廣,苗麗,劉岩,王亞軍,蔡月紅,苑志(zhì)剛.應用(yòng)籃式生物(wù)反應器制備Vero細胞人用(yòng)狂犬病疫苗[J].中(zhōng)國(guó)生物(wù)制品學(xué)雜志(zhì),2011,24(5):583-585,589.960

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